VALUTAZIONE DELLA COMPETENZA ALLA TRASFORMAZIONE GENETICA MEDIATA DA A. tumefaciens DI DUE GENOTIPI DI Fragaria × ananassa PER L’INSERIMENTO DI CONSTRUTTI A RNAi

Strawberry (Fragaria × ananassa) is a crop of high agronomic and commercial relevance, but its genetic improvement is challenging due to its octoploid nature and high heterozygosity. Plant biotechnologies represent a strategic opportunity to enhance yield, quality, and competitiveness, as well as to address challenges related to climate change, and biotic and abiotic stresses. In this work, two octoploid strawberry genotypes, Shayda and Koinè, were evaluated to assess their competence for Agrobacterium tumefaciens - mediated transformation. Preliminary tests were carried out to evaluate sensitivity to bactericidal antibiotics (cefotaxime, timentin, and carbenicillin) and to kanamycin, used for the selection of transformed explants. Leaf explants were infected with A. tumefaciens carrying two RNAi constructs: one targeting resistance against P. aphanis, and the other designed to provide triple resistance against P. aphanis, Colletotrichum spp., and Botrytis cinerea. Transformation efficiency was assessed through the expression of a reporter gene (GFP) and confirmed by molecular analyses. The results revealed genotype-specific differences. Cefotaxime and timentin showed lower phytotoxicity, whereas kanamycin proved highly phytotoxic in both genotypes. This study contributes to the development of targeted protocols for strawberry genetic transformation, useful for breeding programs aimed at improving pathogen resistance.

La fragola (Fragaria × ananassa) è una coltura di elevato interesse agronomico e commerciale. Il suo miglioramento genetico risulta complesso a causa della natura ottoploide e dell’elevata eterozigosi. Le biotecnologie vegetali rappresentano un’opportunità strategica per incrementare rese, qualità e competitività, e per rispondere alle sfide legate ai cambiamenti climatici, stress biotici e abiotici. In questo lavoro sono stati valutati due genotipi di fragola ottoploide, Shayda e Koinè, al fine di valutare la loro competenza alla trasformazione mediata da Agrobacterium tumefaciens. Sono stati condotti test preliminari di sensibilità ad antibiotici battericidi (cefotaxime, timentina e carbenicillina) e alla kanamicina, impiegata per la selezione degli espianti trasformati. Gli espianti fogliari sono stati infettati con A. tumefaciens contenente due costrutti RNAi: uno mirato alla resistenza contro P. aphanis e l’altro per conferire triplice resistenza contro P. aphanis, Colletotrichum spp. e Botrytis cinerea. L’efficienza di trasformazione è stata valutata tramite l’espressione di un gene reporter (GFP) e confermata da analisi molecolari. I risultati hanno evidenziato differenze genotipo-specifiche. Cefotaxime e timentina hanno mostrato minore fitotossicità, mentre la kanamicina si è rivelata altamente fitotossica. Lo studio contribuisce alla definizione di protocolli mirati per la trasformazione genetica della fragola, utili al miglioramento genetico per la resistenza ai patogeni.