Effetti del Delta-9 Tetraidrocannabinolo sulla Competenza dell'Oocita e sullo Sviluppo Embrionale Precoce

The thesis focuses on a study aimed at demonstrating the negative effects of the primary component of Cannabis, Delta-9 Tetrahydrocannabinol (THC), on oocyte competence and early embryonic development. Bovine oocytes divided into 5 treatment groups were used for the study: control, vehicle control (3.2μM of 1: 1: 18 ethanol: tween: saline buffer), low therapeutic THC (0.032μM), medium recreational THC (0.32μM), high recreational THC (3.2μM). Sui gruppi di trattamento sono state eseguite delle analisi riguardanti la qualità e i parametri di sviluppo sia degli ovociti che delle blastocisti: tasso di maturazione, tasso di segmentazione, tasso di blastocisti, morfologia del fuso meiotico, conteggio dei nuclei, colorazione differenziale, espressione dell'm-RNA della Connessina e della proteina Connessina, colorazione TUNEL, espressione dell'm-RNA della Caspasi 9 e antagonisti CB1 o CB2. The results of the analyzes showed that THC arouses its effects by binding the CB1 and CB2 receptors of the endocannabinoid system and that it represents an initial stress factor for oocytes, reducing their overall fertility and hindering their maturation, fertilization and embryonic development. Furthermore, THC represents a selection factor for quality oocytes, able to correctly continue maturation, fertilization and early stages of embryonic development. However, high doses of THC overactivate the endocannabinoid system inducing apoptosis in blastocyst cells, preventing their proper implantation. Hence, the present study confirmed that THC causes negative and destructive effects on the processes leading to oocyte maturation and early pre-implantation embryonic development.

La tesi è incentrata su uno studio volto a dimostrare gli effetti negativi del componenti primario della Cannabis, il Delta-9 Tetraidrocannabinolo (THC), sulla competenza dell'oocita e sullo sviluppo embrionale precoce. Per lo studio sono stati utilizzati ovociti di bovino suddivisi in 5 gruppi di trattamento: controllo, controllo del veicolo (3,2μM di 1:1:18 etanolo:tween:buffer salino), basso THC terapeutico (0,032μM), medio THC ricreativo (0,32μM), alto THC ricreativo (3,2μM). Sui gruppi di trattamento sono state eseguite delle analisi riguardanti la qualità e i parametri di sviluppo sia degli ovociti che delle blastocisti: tasso di maturazione, tasso di segmentazione, tasso di blastocisti, morfologia del fuso meiotico, conteggio dei nuclei, colorazione differenziale, espressione dell'm-RNA della Connessina e della proteina Connessina, colorazione TUNEL, espressione dell'm-RNA della Caspasi 9 e antagonisti CB1 o CB2. I risultati delle analisi hanno dimostrato che il THC suscita i suoi effetti legando i recettori CB1 e CB2 del sistema endocannabinoide e che rappresenta un fattore di stress iniziale per gli ovociti, riducendone la fertilità complessiva e ostacolandone maturazione, fecondazione e sviluppo embrionale. Inoltre, il THC rappresenta un fattore di selezione per ovociti di qualità, in grado di proseguire correttamente maturazione, fecondazione e primi stadi dello sviluppo embrionale. Tuttavia, alte dosi di THC iperattivano il sistema endocannabinoide inducendo apoptosi nelle cellule delle blastocisti, impendendone il corretto impianto. Quindi, il presente studio ha confermato che il THC causa effetti negativi e distruttivi sui processi che portano alla maturazione dell'oocita e allo sviluppo embrionale precoce pre-impianto.