Studio degli effetti fisiologici delle nanoplastiche sulla linea cellulare di spigola Dicentrarchus labrax

Plastics are now a constant presence in the environment, they can be found everywhere, from the most remote coasts of uninhabited islands to Arctic ice, in the depths of the ocean and even in a wide range of marine organisms (UNEP 2016) In this thesis work, we decided to study in vitro the toxicity of nanoplastics (i.e. polystyrene) of two types 20 nm and 80 nm, using embryonic cells from Dicentrarchus labrax, DLEC as research model. The experimental work involved an initial characterization of NPs whit the transmission electron microscope (TEM) and Dynamic Light Scattering, afterwards the cytotoxic effect of NPs has been evaluated through ATP-lite, the results showed less vitality especially at a concentration of 200 μg/ml. The uptake of NPs was performed by confocal microscopy at 30 minutes of incubation and at 6 h. Analysis of cell morphology by scanning electron microscopy (SEM) showed apoptotic events at 24 h with cells incubated with 20 nm NPs. The last analysis were been, the possible production of reactive oxygen species (ROS) and the apoptosis assay using a flow cytometer, the results o showed an increase in apoptotic cells at 24 h with 20 nm NPs.

Le materie plastiche sono ormai una presenza costante nell’ambiente, questa si trova ovunque, dalle coste più remote di isole disabitate al ghiaccio artico, nelle profondità oceaniche e perfino in una vasta gamma di organismi marini (UNEP 2016). In questo lavoro di tesi, si è deciso di studiare in vitro la tossicità delle nanoplastiche (i.e. polistirene) di due tipologie 20 nm e 80 nm, utilizzando come modello di ricerca, le cellule embrionali di Dicentrarchus labrax, DLEC. Il lavoro sperimentale ha previsto un’iniziale caratterizzazione delle NPs tramite microscopio elettronico a trasmissione (TEM) e Dynamic Light Scattering, successivamente è stato valutato l’effetto citotossico delle NPs tramite ATP-lite, i cui risultati hanno mostrato diminuzione della vitalità soprattutto a concentrazione 200 g/ml. L’uptake delle NPs è stato effettuato tramite microscopia confocale a 30 minuti di incubazione e a 6 h. L’analisi della morfologia cellulare tramite microscopia elettronica a scansione (SEM) ha mostrato eventi apoptotici a 24 h con le cellule incubate con NPs 20 nm. Come ultime analisi è stata valutata l’eventuale produzione di specie reattive all’ossigeno (ROS) ed è stato effettuato un saggio di apoptosi tramite citofluorimetro, i cui risultati hanno mostrato un aumento di cellule apoptotiche a 24 h con le NPs 20 nm.